Curso: Fundamentos y Aplicaciones de CRISPR-Cas en plantas

Curso: Fundamentos y Aplicaciones de CRISPR-Cas en plantas

Fecha: 29 de noviembre al 6 de diciembre de 2021.

Coordinadoras: Sabina Vidal (svidal@fcien.edu.uy); Alexandra Castro (acastro@fcien.edu.uy).

Docentes: Dra. Alexandra Castro, Dra. Sabina Vidal, Mag. Luciana Fleitas. Lic Claudia Deluca, Docentes Invitados: Dr. Rafael Narancio, Mag. Ana Arruabarrena.

Público objetivo: El curso está dirigido a estudiantes del Posgrado en Biotecnología o en Ciencias Biológicas de PEDECIBA, así como otros Posgrados, y a estudiantes avanzados de grado que tengan formación previa en biología molecular.

Objetivos del curso:
El curso busca aportar las herramientas conceptuales y metodológicas para comprender y promover el uso del sistema CRISPR/Cas9 para la investigación y desarrollo en el campo de la biología vegetal.

Al finalizar el curso, los estudiantes deberán:

  • conocer los fundamentos básicos, el mecanismo de acción, el potencial y las limitaciones de la edición genómica usando CRISPR/Cas9.
  • ser capaces de diseñar los distintos componentes específicos de CRISPR/Cas9 e incorporar su uso en proyectos de investigación.
  • ser capaces de analizar los resultados obtenidos mediante la tecnología CRISPR/Cas9.
  • estar capacitados para comprender y adaptar próximos desarrollos en el campo de la edición genómica.

Contenido teórico:
Fundamentos básicos de la edición genómica.

  • La edición genómica en el contexto del mejoramiento genético de las plantas y
    la investigación.
  • Bases moleculares de la edición genómica.
  • Mecanismos de reparación del ADN en plantas.
  • Sistemas de edición genómica: ZFN, TALEN y CRISPR-Cas.
  • CRISPR-Cas9: origen, función en la inmunidad adaptativa de procariotas,
    historia de la tecnología y usos.
  • Manipulación de CRISPR-Cas para edición génica: diseño de sgRNAs y
    construcciones génicas para expresión del sistema en células vegetales.
  • Edición génica libre de ADN.

Versatilidad del sistema CRISPR-Cas.

  • Variantes naturales y sintéticas de sistemas CRISPR-Cas y sus aplicaciones.
  • Base editing, prime editing, regulación transcripcional y epigenética.
  • Edición genómica basada en recombinación homóloga: fundamentos, diseño de
    construcciones y estrategias para mejorar la eficiencia.

Desarrollos nacionales basados en edición génica:

  • Mejoramiento de la calidad en pasturas
  • Mejoramiento de la calidad en tomate
  • Mejoramiento de la tolerancia al déficit hídrico y de la calidad de grano en soja.

Talleres:
Estrategias para la expresión de CRISPR-Cas en plantas.

  • Diseño de construcciones génicas para expresión del sistema CRISPR-Cas9.
  • Diseño de sgRNAs.

Detección eficiente de mutaciones en sitios blanco y no blanco.

  • Estrategias para el genotipado de eventos editados
  • Programas para el análisis de fragmentos

Contenido práctico:

  • Producción y purificación de Cas9-GFP
  • Síntesis de sgARNs por transcripción in vitro. Purificación de sgRNAs
  • Ensamblado de RNPs (Cas9-GFP/sgRNAs)
  • Análisis de la actividad de los complejos RNPs in vitro mediante corte sobre ADN
    blanco.
  • Análisis de la actividad de los complejos de RNPs in vivo: preparación de
    protoplastos de P. patens (OE GFP), transfección de protoplastos con RNPs, visualización de protoplastos editados.

Horarios: todos los días de 13:30 a 18:30
Carga horaria: 30 h (13 h teóricos y 17 h prácticos)
Créditos sugeridos: 4
Modalidad: presencial (lunes 29 de noviembre a viernes 3 de diciembre), virtual (lunes 6 de diciembre).

Inscripción:
Las inscripciones se realizan enviando un mail de interés a la coordinadora del curso, antes del 25 de noviembre. En el mail se debe explicitar el programa de estudios al que pertenece, así como el grado de avance (esto último en caso de estudiantes de grado).

Modalidad de aprobación:
La ganancia del curso se obtiene con el 80 % de asistencia a los prácticos y la presentación de un seminario. La aprobación del curso se obtiene por la presentación de un examen individual, que será enviado por mail y tendrá 24 h para resolverlo.

Calendario de actividades:

Link de zoom para Lunes 6 de diciembre: Tema: Curso CRISPR plantas
Hora: 6 dic. 2021 01:00 p. m. Montevideo
Unirse a la reunión Zoom
https://salavirtual- udelar.zoom.us/j/89634432395?pwd=ZDhEYnhhdXRmRHp3eW11TWFYd0g0dz09
ID de reunión: 896 3443 2395 Código de acceso: 4.&B29J4HN